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了解一下革蘭氏染色儀的使用步驟

發布日期:2020-04-07      點擊:516
  了解一下革蘭氏染色儀的使用步驟吧
 
  1。 塗片:左手持菌液試管,右手持接種環,用接種環從試管培養液中取一環菌,從酒精燈外焰穿過,於載玻片中央塗成薄層(事先在背麵做好標記圓圈)即可,或先滴一小滴無菌水於載玻片中央,用接種環從斜麵上挑出少許,與載玻片上的水滴混合均勻,塗成一薄層。
 
  拔或塞試管塞時,應將試管口通過火焰略加燒灼,最後將接種環在火焰上燒灼滅菌。
 
  2。 幹燥:塗片後在室溫下自然幹燥,也可在酒精燈上略加溫,使之迅速幹燥,但勿靠近火焰。
 
  3。 固定:常用高溫進行固定。即手持載玻片一端,標本麵朝上,在燈的火焰外側快速來回移動3~4次,共約3~4秒。要求玻片溫度不超過60℃,以玻片背麵觸及手背皮膚不覺過燙為宜,放置待冷後染色。
 
  4. 染色:
 
  (1)初染: 加草酸銨結晶紫一滴,約一分鍾,水洗。
 
  (2)媒染: 滴加碘液衝去殘水,並覆蓋約一分鍾,水洗。
 
  (3)脫色: 將載玻片上的水甩淨,並襯以白背景,用95%酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20—30秒,立即用水衝淨酒精。
 
  (4)複染: 用番紅液染1—2分鍾,水洗。
 
  5. 鏡檢: 幹燥後,置油鏡觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過於密集的細菌,常常呈假陽性。
 
  6. 同法在一載玻片上以大腸杆菌與枯草芽孢杆菌混合製片,作革蘭氏染色對比。
 
  革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應
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